全国咨询服务热线
400-0969235

当前位置
主页 > 产品中心 >

水中大肠杆菌的检测方法

发布日期:2020-10-28 14:59

  水中大肠杆菌的检测方法_临床医学_医药卫生_专业资料。附件 水中大肠杆菌群检测方法-多管发酵法 NIEA E201.54B 一、 方法概要 本方法系用以检测水中革兰氏染色阴性,不产生内生孢子之杆状好氧或 兼性厌氧菌,且能在 35 ± 1 ℃、48 ± 3

  附件 水中大肠杆菌群检测方法-多管发酵法 NIEA E201.54B 一、 方法概要 本方法系用以检测水中革兰氏染色阴性,不产生内生孢子之杆状好氧或 兼性厌氧菌,且能在 35 ± 1 ℃、48 ± 3 小时发酵乳糖并产生酸及气体之 大肠杆菌群(Coliform group);在不同体积或不同稀释度之水样所产生之 结果,以「100 mL 水中最大可能数(MPN/100 mL)」表示 100 mL 水中存在 之大肠杆菌群数目。 二、 适用范围 本方法适用地面水体、地下水体、废水、污水及水源水质水样中大肠杆 菌群之检验。 三、 干扰 (一) 水样中含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长之物质。 (二) 检测使用的玻璃器皿及设备含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长的物 质。 1 / 16下载文档可编辑 四、 设备 (一) 量筒:100 至 1000 mL 之量筒。 (二) 吸管:有 0.1 刻度之 10 mL 灭菌玻璃吸管或市售无菌塑料吸管,或无菌 微量吸管(micropipet)。 (三) 试管:大小约 150 × 15 mm 之试管或有盖螺旋试管。 (四) 发酵管(fermentation tube):大小约 22 × 9 mm 之玻璃管。 (五) 稀释瓶:容量约 100 mL 可灭菌之硼硅玻璃制品。 (六) 锥形瓶:200 至 2000 mL 之可灭菌硼硅玻璃制品。 (七) 采样容器:容量 120 mL 以上无菌之硼硅玻璃瓶或无菌塑料有盖容器, 或市售无菌袋。6up。 (八) 冰箱:温度能保持在 4 ± 2℃者。 (九) 天平:待测物重量大于 2 g 时,须能精秤至 0.01 g;待测物重量不大于 2 g 时,须能精秤至 0.001 g。 (十) 培养箱:温度能保持在 35 ± 1℃者。 (十一)高压灭菌釜:温度能维持在 121℃(压力约 15 lb/in2 或 1.1 Kg/cm2) 灭菌 15 分钟以上者。 2 / 16下载文档可编辑 (十二)高温干热烘箱:如用于玻璃器皿等用具之灭菌,温度须能保持在 160℃ 达 2 小时或 170℃达 1 小时以上者。 (十三)接种环:为白金或镍铬合金制,适用于细菌接种或移植,亦可使用无菌 塑料制品。 (十四)pH 计:精确度达 0.1 pH 单位。 五、 试剂 (一) 试剂水:蒸馏水或去离子水,导电度在 25 ℃时小于 2 μ mho / cm(μS / cm)。 (二) 培养基,应使用市售商品化培养基。 1、 硫酸月桂酸胰化蛋白胨培养基(Lauryl sulfate tryptose broth, 简称 LST) 1 倍浓度 LST 培养基含有下列成份: 胰化蛋白胨(Tryptose) 20.0g 乳糖(Lactose) 5.0g 5.0g 氯化钠(NaCl) 3 / 16下载文档可编辑 2.75g 磷酸氢二钾(K2HPO4) 2.75g 磷酸二氢钾(KH2PO4) 硫酸月桂酸钠(Sodium lauryl sulfate) 0.1g 试剂水 1L 配成 2 倍浓度(取 71.2 g LST 培养基粉末溶于 1 L 试剂水),完 全溶解后,分取 10 mL 注入装有倒置发酵管之试管内,经 121℃灭菌 15 分钟,冷却后备用,灭菌后培养基之 pH 值应在 6.8 ± 0.2。灭菌后培 养基若未当日使用,应保存在 4 ± 2℃,保存期限为 14 天。可根据检验 需求量,依配方配制培养基。 2、 煌绿乳糖胆汁培养基(Brilliant green lactose bile broth,简 称 BGLB) 1 公升的 BGLB 培养基中含有下列成份: 蛋白胨(Peptone) 10.0g 乳糖(Lactose) 10.0g 4 / 16下载文档可编辑 牛胆粉(Oxgall Powder) 20.0g 煌绿色试剂(Brilliant Green) 0.0133g 试剂水 1L 取 40 g BGLB 培养基粉末溶于 1 L 试剂水,完全溶解后,分取 5 至 10 mL 注入装有倒置发酵管之试管内,经 121℃灭菌 15 分钟,冷却后备 用,其 pH 值应在 7.2 ± 0.2。灭菌后培养基若未当日使用,应保存在 4 ± 2℃,保存期限为 14 天。可根据检验需求量,依配方配制培养基。 (三) 无菌稀释液 1、 磷酸二氢钾储备溶液 取 3.4 g 磷酸二氢钾(KH2PO4)溶于 50 mL 的试剂水中,俟完全溶 解后,以 1.0 N NaOH 溶液调节其 pH 值为 7.2 ±0.1,然后加试剂水至 100 mL,灭菌(过滤灭菌或 121 ℃高温高压灭菌 15 分钟)后储存于冰箱 中备用。4 ± 2 ℃下保存期限为 3 个月。 2、 氯化镁储备溶液 5 / 16下载文档可编辑 取 8.1 g 氯化镁(MgCl2? 6H2O),先溶于少量试剂水,俟完全溶解 后,再加试剂水至全量为 100 mL,灭菌(过滤灭菌或 121℃高温高压灭 菌 15 分钟)后,储存于冰箱中备用。4 ± 2 ℃下保存期限为 3 个月。 3、 无菌稀释液 分别取 10 mL 氯化镁储备溶液和 2.5 mL 磷酸二氢钾储备溶液再加 入试剂水至 2,000 mL,混摇均匀后,分装于稀释瓶中,经 121℃灭菌 15 分钟,作为无菌稀释液备用。如欲用于水样稀释,分装之无菌稀释液灭 菌后体积须为 90 ± 2.0 mL。4 ± 2 ℃下保存期限为 3 个月。 六、 采样与保存 (一) 盛装水样检验微生物之容器,应使用清洁并经灭菌之玻璃瓶或无菌 塑料容器或市售无菌采样袋,且于采样时应避免受到污染。水样若含有余 氯时,无菌容器中应加入适量之无菌硫代硫酸钠(采取加氯之废水时,每 100 mL 水样中加入 0.1 mL、10%硫代硫酸钠可还原 15 mg/L 余氯。采取含 氯之饮用水水样时,每 100 mL 之水样如加入

Copyright ©2015-2020 6up【真.正规】 版权所有 6up保留一切权力!