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6up【检测课堂】水中微生物检测方法

发布日期:2020-10-28 14:59

  哈喽大家好!好久不见,欢迎回到检测课堂,天气越来越热,给细菌滋生提供了非常便利的条件,给畜禽健康埋下隐患。本期继续讲解《水中微生物检测方法》,希望大家加以重视,学以致用。

  (1)将待检样品、灭菌生理盐水、培养皿、注射器、移液器、15ml灭菌离心管、酒精灯、试管架、记号笔等实验物品(不拆封)放入超净工作台内,打开紫外线)关闭紫外线cm处,手进入超净台后用酒精棉球擦拭整个手掌,点燃酒精灯,在酒精灯旁将离心管拆封放置在试管架上,用注射器吸取9ml灭菌生理盐水,依次加注到离心管当中(离心管数量为:样品数×2)。

  将待检水样充分混匀用移液器吸取1ml,加入到盛有9ml灭菌生理盐水的离心管中,反复吹吸5次以上混匀后制成1:10的稀释液;再从1:10的稀释液中取1ml加入到盛有9ml无菌生理盐水的离心管中,反复吹吸5次以上混匀后制成1:100的稀释液。(本样品稀释到1:100,如样品污染严重或检测后菌落生长较多,可继续稀释检测。)

  (1)在平板上分别标注养殖场名称、取水位置、培养基名称、稀释倍数。(一般稀释倍数标注1:10的稀释液用-1表示;1:100的稀释液用-2表示以此类推。)

  (4)取配置好的培养基,待温度降至45℃左右(以不烫手背又未出现凝集块为宜)快速倾注到标注与培养基名称相同的培养皿内。每个培养皿15ml-20ml,不易过薄或过厚。

  (6)每个培养皿在倒完琼脂后均要在台面上延顺时针和逆时针各转3圈,以确保样品与培养基充分混匀。

  (7)待琼脂完全凝固后放入37℃恒温箱中倒置培养24-48h,观察结果,记录菌落数。

  (1)将倒好培养基的培养皿用记号笔标记上养殖场名称、取水位置、稀释梯度、培养基名称。

  (2)用移液器按标记好的梯度每种培养基加入100µL样品到对应的培养皿中,用灭菌的涂布棒将其均匀涂开,涂好后放在超净台台面,使其充分吸收待检样品。

  (4)待液体完全吸收后,将培养皿放置37℃恒温箱中倒置培养24-48h,观察结果,记录菌落数。

  1、选取菌落在30CFU-300CFU之间的稀释梯度平板计数;若最低稀释倍数菌落数仍低于30CFU的平板记录具体菌落数即可;若最高稀释倍数菌落数仍大于300CFU的可记录为多不可计,或数清菌落数计数;若连续2个稀释梯度菌落数均在30CFU-300CFU之间,则将这两个稀释梯度分别计数。

  2、其中一个平板有较大片状菌落蔓延生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布均匀,可计算半个平板菌落数后乘以2,代表一个平板菌落。

  3、当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。

  4、营养琼脂计数培养皿内全部菌落;麦康凯琼脂只计数粉红或玫红色菌落,如图1;甘露醇氯化钠琼脂只计数表面圆润光滑形态微小的金黄色菌落,如图2;SS琼脂只计数无色半透明有黑心的圆润微小菌落,如图3;含CaCO3的GYP琼脂只计数周围有透明圈的菌落,如图4。

  6、按以上方式计数菌落数量后乘以该培养皿中样品的稀释倍数记录结果;若每个稀释度都有平行试验的,应采用两个平板的平均数;若连续两个稀释梯度的菌落数均在30CFU-300CFU之间的,将分别计数的两个数值分别乘以相应的稀释倍数后,计算其平均值记录结果。

  2、若菌落数大于100个,则保留前两位,第三位四舍五入,以10的指数形式来表示。例如:168个则计数为1.7×102;1686个则计数为1.7×103。

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