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细菌的检查方法

发布日期:2020-09-03 09:10

  细菌的检查方法_生物学_自然科学_专业资料。细菌学诊断 不同期不同标本 避免杂菌污染 标本采集和 用抗生素以前 送检六原则 采集病变明显部位 标本必须新鲜 标本作好标记 病原菌检测 细菌形态与结构检查 显微镜放: 普通光学

  细菌学诊断 不同期不同标本 避免杂菌污染 标本采集和 用抗生素以前 送检六原则 采集病变明显部位 标本必须新鲜 标本作好标记 病原菌检测 细菌形态与结构检查 显微镜放: 普通光学显微镜 :0.25um 0.25mm 电子显微镜:透射电镜、扫描电镜 染色法 结晶紫 1min 卢戈碘 1min 95%乙 醇30s 稀释复 红 30s 的意义 1.将细菌区分为2大类 2.指导选择抗菌药物 3.用于细菌致病性等方面的研究 病原菌检测 直接涂片镜检 形态和染色性具有特征的致病菌,直接涂片 染色后镜检有助初步诊断。 痰液 抗酸性细长杆菌 结核杆菌 脑脊液 淤血点 肾形,G-双球菌 脑膜炎奈瑟菌 脓液 G+葡萄串状球菌 葡萄球菌 病原菌检测 分离培养和鉴定 确诊细菌感染性疾病最可靠的方法 (金标准),有助于选用抗菌药物及评 价疗效。 ①普通培养法(需氧培养法) ②高渗培养法 ③厌氧培养法 病原学诊断 一般检验程序 临床标本 涂片染色 初步诊 断报告 预处理 增菌 接种培养基,分离单个菌落 各种鉴定试验 快速诊 断试验 涂片染色 生化试验 血清学实验 动物试验 药敏试验 最终诊断报告 病原菌检测 分离培养和鉴定 ①培养特征:营养、生长条件、 菌落特征 ②形态特征:细菌形态、排列、 染色性 ③生化反应:检测细菌对各种基质(糖类 和蛋白质)的代谢作用和代谢产物的差异, 借以区别和鉴定细菌。 病原菌检测 生化反应 如:幽门螺杆菌尿素酶分解尿素产氨, 使培养液变碱,pH指示剂变色。 微量、快速、半自动或自动细菌生 化鉴定和细菌药敏分析系统,使病 原菌检出水平提高,时间缩短。 病原菌检测 血清学试验 用含已知特异性抗体的免疫血清,可有效检 出标本中极微量细菌特异抗原,或与分离培 养出的未知纯种细菌进行血清学试验,确定 致病菌的种或型。 常用方法有玻片凝集试验、酶联免疫吸 附试验(ELISA)、协同凝集、乳胶凝 集、免疫电泳、间接血凝等试验。 病原菌检测 动物试验 利用实验动物可进行病原菌的分离鉴 定,检测细菌毒力等。 常用实验动物有小鼠,豚鼠和家兔等。 接种途径有皮内、皮下、腹腔、肌 肉、静脉等。 病原菌检测 药物敏感试验 纸片法 试管稀释法 病原菌检测 其他方法 分子生物学技术 核酸杂交技术 PCR 生物芯片技术 PCR技术 聚合酶链反应是一种模拟天然DNA复制的体外 扩增法,其基本原理如下: 加热使双链DNA解开螺旋 ↓ 在退火温度条件下引物同模板杂交 ↓ 在Taq DNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合适pH缓 冲液存在条件下延伸引物 ↓ 重复上述变性→退火→引物延伸过程至25-40个 循环。靶序列被扩增上百万倍, 达到体外扩增核酸序列的目的。 核酸杂交技术 杂交方法是一种分子生物学的标准技 术,用于检测DNA或RNA分子的特定序列 (靶序列)。 DNA或RNA先转移并固定到硝酸纤维 素或尼龙膜上,与其互补的单链DNA或 RNA探针用放射性或非放射性标记。 在膜上杂交时,探针通过氢键与其互 补的靶序列结合,洗去未结合的游离探针 后,经放射自显影或显色反应检测特异结 合的探针。 生物芯片技术 该技术系指将大量(通常每平方厘米点 阵密度高于 400 )探针分子固定于支持物 上后与标记的样品分子进行杂交,通过检 测每个探针分子的杂交信号强度进而获取 样品分子的数量和序列信息。 血清学诊断 用已知抗原检测病人血清抗体 直接凝集试验 补体结合试验 中和试验 乳胶凝集 ELISA

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