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电阻抗法检测食品细菌总数

发布日期:2020-09-21 09:48

  电阻抗法是新发展起来的应用于食品细菌检验的一项电化学技术。目前电阻抗法已普遍用于检测食品中细菌总数、大肠菌群、沙门氏菌。与平板计数法相比电阻抗法的最大优点在于快速、灵敏、简便, 对大多数培养基, 当细菌浓度达到106~107 个/ mL 时即可出现可检测的阻抗变化。检测所需的时间, 根据样品中细菌浓度不同而异, 一般只需几小时到十几小时即可得出细菌总数的检测结果。

  食品中的细菌多少是评价食品品质的一项重要指标, 传统细菌学检验方法是采用平板计数法, 对未知样品往往要连续做3~4 次10 倍稀释, 才能得到合适的平板菌落数,每个样品需做6~8个平板, 每当样品数很多时, 检测工作量相当大。另外平板计数法需用48h 才能获得结果,确实不能满足食品检验准确、快速的要求。918博天堂,应用于电化学技术的电阻抗法,是通过电板连续性对培养基的电阻抗法进行测量,便可知道某种细菌在特定的培养基中的生长、繁殖情况。特别是将其用于检测食品中细菌总数、大肠菌群、沙门氏菌等,与平板计数法相比,电阻抗法最大的优点快速、灵敏、简便。对大多数培养基当细菌浓度达到106~107 个/ mL,即可出现可检测的阻抗变法,如接种量低于这个浓度,则需经过充分时间增菌使其达到阈限, 才能出现可检测信号。检测所需的时间要根据样品中细菌浓度的不同而异, 一般只需几小时到十几小时就能得出细菌总数的检测结果。电阻抗法具有高度的灵敏性, 在临床标本的检查中,可测出每亳升血液含有0.1CFU (菌落形成单位)。

  电阻抗法采用自动化程序, 通过计算机控制对样品进行连续性检测,并自动判断出检测结果,从而可大大提高检测效率、缩短检测时间,优越于其它检测方法,且准确无误。

  在细菌培养过程中, 培养基中的大分子营养物质, 如碳水化合物、蛋白质等被微生物代谢为较小的带电粒子, 增强了溶液的导电性能, 从而降低了培养基的阻抗值(Z) ,将培养基阻抗变化的相对值定为M:

  其中: Z0为开始测量时培养基的阻抗值; Z 为任意时刻培养基的阻抗值。

  培养基的阻抗值受多种因素的影响, 除微生物代谢活动外, 物理化学因素也能造成系统的阻抗变化。对大多数微生物, 培养基的阻抗值自接种时起至生长稳定期约下降4 %。为描述因微生物的显著生长而造成培养基阻抗的下降, 设定M 值的阈值, 从测量开始到设定阈值需要的时间定为阻抗检测时间CFU 。阈值的设定根据培养基所测样品的不同而异, 在一定范围内菌落形成单位(CFU) 的对数10g CFU 与IDT 呈直线关系,通过测定一系列已知CFU 样品的IDT 值, 可以制定标准曲线。对于未知样品, 只需测定其IDT 值, 再查标准曲线即可得到CFU 的数值。

  培养基制备: 称取电阻抗测细菌总数专用培养基15g 溶解于1L 蒸馏水中, 按每管9mL 分装于专用测量管中, 121 ℃高压灭菌15min。

  仪器参数: 设定示标仪培养温度30 ℃; 设定M 值的阈值为5 %; 最大检测时间24h ; 测定间隔为10min ; 延迟时间设为1h 。

  标准曲线制备: 吸取所制备样品上清液1mL , 接种于测量管中, 轻轻摇匀。将示踪仪设定为制标状态, 放入接种好的测量管, 开始检测, 示踪仪将自动记录培养期间的阻抗变化, 并最终测出每个样品的阻抗检测时间( IDT) 。同样用平板计数法测出样品的平板菌落数(CFU) , 将结果输入微机, 与相应的IDT 值相对应。对这些数字进行回归, 即可得到标准曲线和回归方程。

  样品检测: 取制备好的样品上清液1mL 接种于测量管中, 轻轻摇匀。将示踪仪设为检测状态, 选定标准方程。放入测量管, 开始测量, 当检测结束后, 电脑将自动打印出检测的结果。

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