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菌落总数检测操作规程(国标word版)

发布日期:2020-11-03 15:21

  菌落总数检测操作规程(国标word版)_计算机硬件及网络_IT/计算机_专业资料。国家标准的word版本4789.2-2010

  山西梁汾醋业有限公司 文件类别及编号: LF-GC-01 菌落总数测定标准操作规程 制订人: 制订日期: 颁发部门: 审核人: 审核日期: 分发部门: 版次 共 制订年份: 批准人: 批准日期: 生效日期: 页 第 页 年 菌落总数测定的标准操作规程 1. 目的 规范山西老陈醋菌落总数测定的操作规程,保证山西老陈醋产品的质量。 2. 适用范围 酿造食醋和配制食醋菌落总数的测定。 3. 仪器设备 恒温培养箱,冰箱,恒温水浴箱,天平(0.1g),均质器,振荡器;无菌吸管 1ml(0.01 刻度)、 10ml(0.1ml 刻度)或微量移液器及吸头; 无菌锥型瓶, 250ml/500ml; 无菌培养皿:直径 90mm;PH 计或精密 PH 试纸;放大镜或菌落计数器 4.培养基和试剂 4.1 平板计数琼脂培养基, 成分: 胰蛋白胨 酵母浸膏 葡萄糖 琼脂 蒸馏水 5.0g 2.5g 1.0g 15.0g 1000ml PH7.0±0.2 制法:将上述加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节 PH。分装试管或锥型瓶,121℃高 压灭菌 15min。 4.2 磷酸盐缓冲液 1 成分: 磷酸二氢钾(KH2PO4) 蒸馏水 PH 7.2 制法: 贮存液:称取 34.0g 磷酸二氢钾溶于 500ml 蒸馏水中,用大约 175ml 的 1mol/L 氢氧化钠溶液调节 PH,蒸馏水稀释至 1000ml 存于冰箱。 稀释液:取贮存液 1.25ml,用蒸馏水稀释至 1000ml,分装于适宜容器中,121 摄氏 度高压灭菌 15 分钟。 4.3 无菌生理盐水 成分: 氯化钠 蒸馏水 8.5g 1000ml 34.0g 500ml 制法:8.5 克氯化钠溶于 100ml 蒸馏水中 121 摄氏度高压灭菌 15 分钟。 5 检验程序 2 检样 25 g(mL)样品+225 mL 稀释液,均质 10 倍系列稀释 选择 2-3 个适宜稀释度的样品均液, 各取 1ml 分别加入无菌培养皿内 每皿中加入 15ml-20ml 平板计数琼脂培养基,混匀 培养 计数各平板菌落数 计算菌落总数 报告 6 操作步骤 6.1 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品: 称取 25 g 样品置盛有 225mL 磷酸盐缓冲液 或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min~10000 r/min 均质 1min~ 2min,或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器 拍打 1 min~2 min,制成 1:10 的样品匀液。 6.1.2 液体样品: 以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐 缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠) 中,充分混匀,制成 1:10 的样品匀液。 3 6.1.3 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1mL,沿管 壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不 要触及稀释液面) ,振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合 均匀,制成 1:100 的样品匀液。 6.1.4 按 1.4.1.3 操作程序,制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释 一次,换用 1 次 1 mL 无菌吸管或吸头。 6.1.5 根据对样品污染状况的估计, 选择 2 个~3 个适宜稀释度的样品 匀液(液体样品可包括原液) ,在进行 10 倍递增稀释时,吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。6up,同时,分别吸取 1mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 6.1.6 及时将 15 mL~20mL 冷却至 46℃的平板计数琼脂培养基 (可放 置于 46 ±1℃℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混 合均匀。 6.2 培养 6.2.1 待琼脂凝固后,将平板翻转,36℃±1℃培养 48 h±2 h。水产品 30℃±1℃培养 72 h±3 h。 6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可 在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基 (约 4 mL) 凝固后翻转 , 平板,按 1.4.2.1 条件进行培养。 6.3 菌落计数 可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应 的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-forming units,CFU) 4 表示。 6.3.1 选取菌落数在 30CFU~300CFU 之间、 无蔓延菌落生长的平板计 数菌落总数。低于 30CFU 的平板记录具体菌落数,大于 300CFU 的 可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 6.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无 片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数; 若片状菌落不到平板的 一半, 而其余一半中菌落分布又很均匀, 即可计算半个平板后乘以 2, 代表一个平板菌落数。 6.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链 作为一个菌落计数。 7 结果与报告 7.1 菌落总数的计算方法 7.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两 个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每 g (mL)样品中菌落总数结果。 7.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按公 式(1)计算: N =∑C/(n1 +0.1n2 )d 式中: N——样品中菌落数; ∑C——平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和; n1——第一稀释度(低稀释倍数)平板个数; 5 ?????????????(1) n2——第二稀释度(高稀释倍数)平板个数; d——稀释因子(第一稀释度) 。 示例: N =∑C/(n1 +0.1n2 )d =(232+244+33+35)/[2+(0.1×2)]×10-2=544/0.022=24727 上述数据按 1.6.2 数字修约后,表示为 25000 或 2.5×104。 7.1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300 CFU,则对稀释度最 高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数 乘以最高稀释倍数计算。 7.1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于 30 CFU, 则应按稀释度最低 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 7.1.5 若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以 小于 1 乘以最低稀释倍数计算。 7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在 30 CFU~300 CFU 之间,其 中一部分小于 30 CFU 或大于 300 CFU 时,则以最接近 30 CFU 或 300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 7.2 菌落总数的报告 7.2.1 菌落数小于 100 CFU 时,按“四舍五入”原则修约,以整数报 告。 7.2.2 菌落数大于或等于 100 CFU 时,第 3 位数字采用“四舍五入” 原则修约后,取前 2 位数字,后面用 0 代替位数;也可用 10 的指数 形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。 6 7.2.3 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延。 7.2.4 若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。 7.2.5 称重取样以 CFU/g 为单位报告,体积取样以 CFU/mL 为单位 报告。 7

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