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6up中华人民共和国国家标准细菌内毒素检测方法

发布日期:2020-12-10 02:07

  中华人民共和国国家标准细菌内毒素检测方法_医药卫生_专业资料。医用输液、输血、注射器具细菌内毒素检验方法 中华人民共和国国家标准 GB/T14233.2—93 1993-03-16 发布 一、 定义及适用范围:本法系列用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应 的机理,

  医用输液、输血、注射器具细菌内毒素检验方法 中华人民共和国国家标准 GB/T14233.2—93 1993-03-16 发布 一、 定义及适用范围:本法系列用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应 的机理,以判断供试品中内毒素限量是否符合规定的一种方法。 用以代替家兔法对供试品进行热原初试。本法仅适用于一次性使 用输液器、输血器。其他产品可参照使用。 二、主要设备:超净工作台、电热干燥箱、恒温水浴。 三、试剂 1、细菌内毒素国家标准品:用于仲裁鲎试剂灵敏度和试 验中阳性对照。 2、细菌内毒素工作标准品:用于标定鲎试剂灵敏度和试 验中阳性对照。 3、鲎试剂:灵敏度为 0.25EU/ml,规格为 0.5ml。 4、无热原水:内毒素含量小于 0.05EU/ml。 四、试验前准备 1、器具除热原:与试验液接触的所有器具均应除热原。玻璃器具置 电热干燥箱内 250℃干烤至少 60min;塑料器具置 30%双氧水中浸泡 4h,再用无热原水冲洗后于 60℃烘干备用。 2、鲎试剂灵敏度测定 (1) 试验前应核对使用批号鲎试剂的灵敏度,应符合规定。 (2)灵敏度测定:根据标示的灵敏度范围,将细菌内毒素工作 标准品用无热原水以 1→2 等比稀释,选择能出现阳性和阴性结 果的 4 个连续稀释液。取同一批号鲎试剂若干支,分别按标示量 加入无热原水溶解为鲎试剂溶解液。取 10mm×75mm 试管若干 支,分别加入 0.1ml 鲎试剂溶解液,加入内毒素稀释液 0.1ml, 每一稀释液平行操作 4 管,轻轻振动试管混匀内容物,封闭管 口,置 37±1℃恒温水浴中保温 60±2min 观察结果。最高浓度的 4 管应均为阳性,最低浓度的 4 管应为阴性。 五、试验方法 1、供试品数量 :同一批号至少 3 个单位供试品。 2、浸提介质:无热原水。 3、供试液制备:在无菌条件下,每套输液器内腔注入 10ml,输血 器内腔注入 15ml 浸提介质,反复荡洗 5 次后两端密封,置 37±1℃恒 温箱中保温 2h,取出后将供试液汇集至一无热原具塞玻璃容器内。供 试液贮存应不超过 2h。 4、试验步骤:将鲎试剂和细菌内毒素工作标准品分别按标示量加 入无热原水溶解。细菌内毒素工作标准品逐次稀释至 0.5Eu/ml,供作 阳性对热。取 10mm×75mm 试管 6 支,其中供试品管 2 支各加入 0.1ml 内毒素工作标准品稀释液,阴性对照管 2 支各加入 0.1ml 无热原水, 阳性对照管 2 支各加入 0.1ml 内毒素工作标准品稀释液,再逐一加入 0.1ml 鲎试剂溶解液。轻轻混匀试管内容物,封闭管口,垂直放入 37 ±1℃水浴中保温 60±2min,轻轻取出,观察结果。 5、结果判定 1)、将试管缓慢倒转 180°,管内容物呈坚实凝胶者为阳性, 记录为(+),不呈凝胶状或虽呈凝胶状但不能保持完整者为阴性,记 录为(-)。 2)、供试品 2 管均为(-)性时,判定产品符合本法规定,不 再进行热原试验。 3)、供试品 2 管均为(+)或有 1 管为(+)时,用无热原水将 供试液 1→2 等比稀释按上述方法重试,供试品操作 4 管。如 4 管均为 (-),判定产品符合本法规定,不再进行热试验。 4)、重试供试品 4 管中有 1 管为(+)时,判定产品不符合本 法规定,应进行热原试验,并根据试验结果判定。 5)、供试品细菌内毒素限量应不超过 0.5 EU/ml。 6)、阳性对照 2 管应均为(+),阴性对照 2 管应均为(-), 否则试验无效。

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